sCMOS相机凭借高灵敏度、高动态、低读出噪声特性,成为生命科学成像领域的核心设备。在光片荧光显微镜LSFM成像应用中,传统卷帘快门的时序限制可能引发运动伪影或光片照明不均匀问题。可编程快门模式通过精确控制传感器曝光时序,实现与激光扫描振镜的高效同步,提升动态成像质量。
可编程快门模式原理
普通卷帘快门的曝光与读出按行顺序逐行进行,导致不同行之间存在时间差,如图1。光片显微镜中,若激光扫描速度与快门时序不同步,可能引发照明位置偏移,如图2。
图1
图2
为实现与光片显微镜振镜的高精度时序配合,sCMOS科学相机在普通卷帘快门模式基础上添加了额外的延迟步骤,形成了可编程快门模式。该模式通过引入延迟时间(delay),调整相邻行曝光起始点的间隔,使激光光片与传感器感光行的位置同步,这其中有两个关键参数需要设置:1.激光扫描速度;2.激光光片宽度。
1.激光扫描速度:即单位时间内激光光片在样品内的移动距离。
由上述可编程快门模式的时序图可知,每一行与上一行差一个延迟时间。所以为了让每次激光光片与待曝光的行之间的位置关系固定,要求延迟时间内激光扫描过的距离刚好等于1行,如视频1。
经过一个延迟时间delay后,第一行和第二行与激光光片的位置关系完全相同,后续周期性重复即可,如图3。
图3
图4
图5
以典型参数(像元尺寸6.5μm×6.5μm,line_time=11.2μs,delay=4)为例,扫描速度需为:v=6.5 μm /4×11.2 μs =0.145 m/s
若扫描速度偏离理论值,则一个延迟时间delay后激光光片中心与下一行待感光区域不重合,影响下一行的成像。继续扫描累积误差会越来越大,甚至会出现下一行感光区域未被激光光片照亮的情况,如视频2。
视频2
2.激光光片宽度:
在科学成像过程中,可能出现多行同时曝光的情况。如果激光光片宽度太窄,则不能将同时曝光的行全部照亮。所以要求激光光片宽度需满足两个条件,一是宽度至少要覆盖最大同时曝光的行数;二是在最多行同时曝光时间内,激光光片宽度需保证这些行持续被照亮。综合以上两个条件可得公式:
激光光片宽度 ≥ 最大同时曝光行数 + 最多行同时曝光时间激光扫描速度
最多行同时曝光时间与延迟时间相关,且最多行同时曝光时间 ≤ 延迟时间。由于激光扫描速度 = 1 行 / 延迟时间,因此最多行同时曝光时间激光扫描速度 ≤ 1 行,进而可得激光光片宽度的限制条件:激光光片宽度 ≥ ceil(曝光时间/延迟时间)+1。
图6
例如,当曝光时间=8×line_time、delay=4时,最大同时曝光行数为2行,则光片宽度需至少覆盖3行,如图6上;当曝光时间=9×line_time、delay=2时,最大同时曝光行数为5行,则光片宽度需至少覆盖6行,如图6下。
可编程快门模式总结
可编程快门模式通过精确调控sCMOS相机的曝光时序,解决了光片显微镜中照明与检测的同步难题。核心参数设计逻辑为:
速度匹配:激光扫描速度需与传感器行曝光间隔严格同步
宽度适配:光片宽度需覆盖动态曝光区域
正确设置上述参数,能够有效发挥sCMOS相机可编程快门模式的优势,为超分辨率成像领域活体样本的长时间观测提供技术保障。